Plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF14 (h): sc-411313

Présentation

PHF14 (PHD finger protein 14) code un régulateur associé à la chromatine, impliqué dans le contrôle transcriptionnel via la reconnaissance des modifications des histones et la coordination des états épigénétiques. Il a été associé à la régulation des programmes de différenciation cellulaire, à la progression du cycle cellulaire et à des réseaux d’expression génique qui façonnent l’organisation du cytosquelette et la signalisation du développement. En modulant l’accessibilité de la chromatine, PHF14 influence des voies impliquées dans la spécification des lignages et l’homéostasie tissulaire, avec une pertinence pour la dérégulation transcriptionnelle observée dans le cancer et les troubles du développement. Les travaux sur PHF14 étayent son utilisation comme nœud d’analyse pour disséquer des phénotypes gouvernés par la chromatine, tels qu’une prolifération et une migration altérées, ainsi qu’une expression génique dépendante du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PHF14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PHF14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PHF14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PHF14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PHF14 pour l'étude de la signalisation de PHF14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PHF14 essentiels à la fonction de PHF14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PHF14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PHF14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PHF14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PHF14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PHF14 plasmide HDR (h) et le PHF14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PHF14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PHF14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.