Plasmide CRISPR/Cas9 KO phapi2 (m): sc-422189

Présentation

Le gène murin **Pemt** code la phosphatidyléthanolamine N‑méthyltransférase, une enzyme clé de la biosynthèse de la phosphatidylcholine, qui catalyse la méthylation séquentielle de la phosphatidyléthanolamine en utilisant la S‑adénosylméthionine. Cette activité contribue à l’homéostasie des phospholipides membranaires, à l’assemblage des lipoprotéines et au métabolisme des donneurs de méthyle, reliant ainsi **PEMT** au remodelage lipidique et aux réponses cellulaires au stress. La production de phosphatidylcholine dépendante de **Pemt** est particulièrement pertinente pour la gestion hépatique des lipides, la fonction du RE (réticulum endoplasmique) et les processus de signalisation dépendant de la composition membranaire. La perturbation des voies médiées par **PEMT** a été associée à des phénotypes de métabolisme lipidique altéré et constitue un modèle accessible pour étudier des mécanismes métaboliques et associés aux membranes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO phapi2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pemt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pemt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pemt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine phapi2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pemt pour l'étude de la signalisation de phapi2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pemt essentiels à la fonction de phapi2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pemt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le phapi2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le phapi2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pemt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le phapi2 plasmide HDR (m) et le phapi2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pemt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pemt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.