Plasmide Double Nickase (h) PGS1: sc-411287-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PGS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PGS1 Double Nickase (h) et le plasmide PGS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PGS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) PGS1 | sc-411287-NIC | 20 µg | $410.00 |
PGS1 code la phosphatidylglycérophosphate synthase 1, une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui catalyse l’étape d’engagement de la production de phosphatidylglycérol, un précurseur indispensable à la biosynthèse de la cardiolipine. Par son rôle dans le réseau de remodelage de la cardiolipine et de l’homéostasie des phospholipides mitochondriaux, PGS1 influence l’efficacité de la phosphorylation oxydative, l’architecture des crêtes mitochondriales et le contrôle qualité mitochondrial sensible au stress. Une perturbation de l’activité de PGS1 peut modifier la composition lipidique membranaire et affecter la dynamique mitochondriale ainsi que les voies de signalisation bioénergétiques. En conséquence, PGS1 est étudié dans le contexte de phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial et de mécanismes pathogéniques liés au métabolisme lipidique, où la disponibilité en cardiolipine constitue un déterminant majeur des performances de l’organite.
PGS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PGS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PGS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PGS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PGS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.