Plasmide CRISPR/Cas9 KO PGE synthase (h): sc-402085

Présentation

PTGES code la prostaglandine E synthase, une enzyme terminale clé de la cascade de l’acide arachidonique qui convertit la prostaglandine H2 issue des COX en prostaglandine E2 (PGE2). En contrôlant l’abondance de PGE2, PTGES contribue à la signalisation inflammatoire, à la sensibilisation à la douleur, aux réponses fébriles et à la modulation de la fonction des cellules immunitaires via les voies des récepteurs EP et la signalisation en aval cAMP/PKA. L’activité de PTGES s’articule avec des programmes induits par les cytokines (par exemple, une induction liée à NF-κB) et influence des processus tels que la régulation du tonus vasculaire et les réponses de la barrière épithéliale. Une biosynthèse dérégulée de la PGE2 et une expression anormale de PTGES ont été associées à l’inflammation chronique et à la signalisation du microenvironnement tumoral, ce qui souligne sa pertinence dans les études mécanistiques des physiopathologies liées à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PGE synthase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTGES dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTGES, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTGES à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PGE synthase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTGES pour l'étude de la signalisation de PGE synthase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTGES essentiels à la fonction de PGE synthase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTGES pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PGE synthase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PGE synthase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTGES. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PGE synthase plasmide HDR (h) et le PGE synthase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTGES pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTGES définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.