Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGD synthase: sc-405437-ACT

HPGDS humain code la prostaglandine D synthase hématopoïétique (PGD synthase), une enzyme dépendante du glutathion qui convertit la prostaglandine H2 en prostaglandine D2 (PGD2). La PGD2 est un médiateur lipidique bioactif qui transmet ses signaux via les récepteurs DP1/DP2 et est ensuite métabolisée en prostaglandines cyclopenténones, reliant ainsi l’activité de HPGDS au métabolisme des eicosanoïdes, à la signalisation inflammatoire et à des programmes cellulaires sensibles à l’état rédox. L’expression de HPGDS est marquée dans les lignées immunitaires et myéloïdes et a été étudiée dans le contexte de l’inflammation allergique, des réponses immunitaires des voies respiratoires et de la peau, ainsi que des processus neuro-inflammatoires. Une altération du flux de la voie de la PGD2 peut influencer le recrutement leucocytaire, les réseaux de cytokines et le remodelage tissulaire, faisant de HPGDS un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes de maladies associées à l’inflammation.

PGD synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HPGDS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGD synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HPGDS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HPGDS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGD synthase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HPGDS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGD synthase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGD synthase dans les cellules tumorales présentant une expression de HPGDS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.