PGAM5 Lentiviral Activation Particles (m): sc-428371-LAC

Das Mausgen *Pgam5* kodiert PGAM5, eine an Mitochondrien verankerte Serin/Threonin-Phosphatase, die die mitochondriale Qualitätskontrolle mit Stress-Signalwegen verknüpft. PGAM5 moduliert Mitophagie und mitochondriale Dynamik über Interaktionen mit PINK1/Parkin sowie der Spaltungsmaschinerie und kann programmierte Zelltodwege beeinflussen, die mit oxidativem Stress in Verbindung stehen. Durch die Regulation phosphorylierungsabhängiger Signalknoten verbindet PGAM5 mitochondriale Dysfunktion mit Entzündungsprozessen und für Neurodegeneration relevanten Mechanismen und ist damit ein nützliches Ziel, um Stressanpassungsmechanismen in Säugerzellen zu untersuchen. Eine veränderte PGAM5-Aktivität wurde mit einer Fehlregulation des Gleichgewichts zwischen Apoptose und Nekrose sowie mit Störungen der Energiehomöostase assoziiert, was ihre Relevanz in Modellen der Stoffwechsel- und Entzündungsbiologie unterstreicht.

PGAM5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Pgam5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PGAM5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Pgam5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PGAM5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Pgam5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.