PFKFB4 Double Nickase Plasmid (h): sc-410933-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PFKFB4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PFKFB4 Double-Nickase-Plasmid (h) und PFKFB4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PFKFB4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PFKFB4: sc-514792
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PFKFB4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410933-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PFKFB4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410933-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PFKFB4 kodiert die 6-Phosphofructo-2-kinase/Fructose-2,6-bisphosphatase 4, ein bifunktionelles Enzym, das die zellulären Spiegel von Fructose-2,6-bisphosphat steuert – einem potenten allosterischen Aktivator von PFK-1 und einem zentralen Regulator des glykolytischen Flusses. Durch die Feinabstimmung des Gleichgewichts zwischen Glykolyse und Pentosephosphatweg unterstützt PFKFB4 die bioenergetische Homöostase, die Redoxkontrolle über die NADPH-Produktion sowie die Verfügbarkeit biosynthetischer Vorstufen. Die Aktivität von PFKFB4 verknüpft Nährstoffsensorik mit metabolischer Reprogrammierung und kann Proliferation, Überleben unter Stressbedingungen sowie Reaktionen auf Hypoxie beeinflussen. Eine dysregulierte Expression oder Funktion von PFKFB4 wurde mit veränderten metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit gestörtem Glukosestoffwechsel beobachtet werden.
PFKFB4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PFKFB4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PFKFB4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PFKFB4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PFKFB4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.