Plasmide CRISPR/Cas9 KO Peroxin 3 (m): sc-425227

Présentation

Pex3 code la péroxine 3, un facteur central de la biogenèse des peroxysomes, localisé à la membrane peroxysomale, qui contribue à initier l’assemblage membranaire en recrutant d’autres péroxines nécessaires à l’import des protéines matricielles. Par son rôle dans la formation des peroxysomes, PEX3 soutient des voies du métabolisme lipidique, notamment la β‑oxydation des acides gras à très longue chaîne, la synthèse des phospholipides éthers (plasmalogènes) et la détoxification des espèces réactives de l’oxygène. La perte de la fonction peroxysomale perturbe l’homéostasie redox cellulaire et la composition lipidique des membranes, ce qui affecte la communication avec les mitochondries et la signalisation inflammatoire. Chez la souris, Pex3 est fréquemment étudié pour modéliser des défauts de biogenèse des peroxysomes et pour explorer comment la perte de peroxysomes influence le neurodéveloppement, le métabolisme hépatocellulaire et l’équilibre énergétique systémique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Peroxin 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pex3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pex3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pex3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Peroxin 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pex3 pour l'étude de la signalisation de Peroxin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pex3 essentiels à la fonction de Peroxin 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pex3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Peroxin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Peroxin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pex3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Peroxin 3 plasmide HDR (m) et le Peroxin 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pex3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pex3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.