Peroxin 14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405075-ACT

PEX14はペルオキシソーム輸送装置の必須構成要素であるペロキシン14をコードしており、PEX5/PEX7受容体複合体をペルオキシソーム膜に係留して、マトリックス酵素の膜通過（トランスロケーション）を可能にします。ペルオキシソームの生合成とタンパク質輸送における役割を通じて、PEX14は脂肪酸のβ酸化、エーテル脂質合成、活性酸素種の解毒を支え、細胞のレドックス恒常性と脂質恒常性に関与しています。ペルオキシソームへの輸送および生合成の異常は、ペルオキシソーム生合成障害や、より広範な代謝・神経発達表現型と関連しており、PEX14の制御はオルガネラ機能不全の機序研究において重要です。ヒト細胞モデルでは、PEX14の発現調節は、ペルオキシソーム依存性経路と、それらがミトコンドリアシグナルや炎症シグナルと相互作用する様式を調べるための取り組みやすい入口となります。

Peroxin 14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PEX14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Peroxin 14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PEX14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPEX14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Peroxin 14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPEX14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPeroxin 14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPEX14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPeroxin 14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。