Plasmide CRISPR d'Activation (m) Perlecan: sc-420986-ACT

Le gène murin *Hspg2* code la perlecan, un grand protéoglycane à héparane sulfate des membranes basales et des matrices péricellulaires, qui organise l’architecture de la matrice extracellulaire et module la signalisation cellule–matrice. La perlecan se lie à des facteurs de croissance tels que FGF et VEGF et coopère avec les intégrines et d’autres protéoglycanes pour réguler l’adhérence, la migration, la mécanotransduction et les réponses angiogéniques, en influençant notamment les voies FGF/FGFR, VEGF/VEGFR et PI3K–AKT/ERK. Au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire, la perlecan contribue à l’intégrité du cartilage et des vaisseaux, à l’organisation de la jonction neuromusculaire et au fonctionnement de la barrière de filtration. Une dérégulation de la biologie de *Hspg2*/perlecan a été associée, dans des modèles précliniques, à des maladies de la membrane basale, à des dysplasies squelettiques et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur la matrice extracellulaire et la signalisation.

Perlecan Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hspg2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Perlecan Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hspg2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hspg2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Perlecan. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hspg2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Perlecan au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Perlecan dans les cellules tumorales présentant une expression de Hspg2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.