Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) PERK: sc-400080-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PERK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PERK Double Nickase (h) et le plasmide PERK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF2AK3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PERK Antibody (B-5): sc-377400
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PERK | sc-400080-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PERK | sc-400080-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2AK3 code PERK, une kinase transmembranaire résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui détecte l’accumulation de protéines mal repliées et déclenche la réponse aux protéines mal conformées (UPR). Lorsqu’elle est activée, PERK phosphoryle eIF2α afin d’atténuer la traduction globale tout en favorisant des programmes de traduction sélectifs, coordonnant ainsi la protéostasie, le contrôle du stress oxydant et des adaptations liées à l’autophagie. La signalisation de PERK s’entrecroise avec les sorties transcriptionnelles médiées par ATF4/CHOP et influence la communication RE–mitochondries ainsi que l’homéostasie rédox. Une activité de PERK dérégulée a été associée à des états de stress chronique du RE impliqués dans la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et l’adaptation des cellules tumorales au stress, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de la signalisation du stress.
PERK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF2AK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF2AK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF2AK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF2AK3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.