Plasmide CRISPR d'Activation (h) Peripherin: sc-401335-ACT

PRPH code la périphérine, une protéine de filament intermédiaire de type III enrichie dans les neurones périphériques, qui contribue à l’architecture du cytosquelette et à l’intégrité axonale. La périphérine participe à l’assemblage et au remodelage des filaments intermédiaires, soutenant l’extension des neurites, le transport axonal et les réponses au stress cellulaire lors de la différenciation et de la régénération neuronales. Son expression est couramment utilisée comme marqueur du développement du système nerveux périphérique et de la reprogrammation associée aux lésions. Une expression dysrégulée de PRPH et une organisation anormale des filaments ont été associées à des processus neurodégénératifs et à la vulnérabilité des motoneurones, ce qui étaye sa pertinence dans les études mécanistiques des dysfonctionnements neuronaux.

Peripherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRPH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Peripherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRPH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRPH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Peripherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRPH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Peripherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Peripherin dans les cellules tumorales présentant une expression de PRPH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.