Plasmide CRISPR d'Activation (h) Periostin: sc-400744-ACT

POSTN code la périostine, une protéine matricellulaire sécrétée, enrichie dans les tissus conjonctifs, qui se lie à des composants de la matrice extracellulaire et aux intégrines afin de réguler l’adhésion cellulaire, la migration et le remodelage tissulaire. La périostine participe à l’organisation de la matrice extracellulaire et à la mécanotransduction, en soutenant une signalisation via les adhésions focales et des voies en aval telles que FAK/PI3K/AKT et MAPK, qui influencent l’activation des fibroblastes et les interactions épithélio‑mésenchymateuses. Une expression altérée de POSTN est associée au remodelage fibrotique et aux réponses tissulaires inflammatoires, et elle est fréquemment liée à la dynamique du microenvironnement tumoral, notamment l’expansion stromale, les signaux pro‑angiogéniques et la formation de niches métastatiques. Ces propriétés font de la périostine un levier moléculaire utile pour étudier la signalisation induite par la matrice extracellulaire et le dialogue cellule–matrice dans des modèles pertinents pour la maladie.

Periostin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POSTN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Periostin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POSTN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POSTN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Periostin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POSTN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Periostin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Periostin dans les cellules tumorales présentant une expression de POSTN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.