Plasmide CRISPR d'Activation (h) Per2: sc-401089-ACT

Le gène humain **PER2** code le régulateur circadien central **Per2**, une protéine contenant un domaine PAS qui participe aux boucles de rétroaction transcriptionnelle–translationnelle contrôlant la rythmicité sur 24 heures. PER2 coordonne la transcription induite par **CLOCK/ARNTL (BMAL1)** en modulant la dynamique des complexes répresseurs et intègre les informations temporelles aux programmes cellulaires tels que le métabolisme, les réponses aux dommages de l’ADN et la progression du cycle cellulaire. En couplant la transcription circadienne à des voies de signalisation incluant des réseaux liés aux glucocorticoïdes, à l’AMPK et aux MAPK, PER2 influence l’expression rythmique de gènes spécifique des tissus. Une activité PER2 dérégulée et un désalignement circadien ont été associés à des troubles du cycle veille–sommeil ainsi qu’à une susceptibilité modifiée à des phénotypes oncogéniques et métaboliques, ce qui en fait une cible utile pour les études de biologie des systèmes et les recherches mécanistiques.

Per2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PER2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Per2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PER2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PER2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Per2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PER2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Per2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Per2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PER2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.