Plasmide CRISPR d'Activation (h) Per1: sc-401260-ACT

PER1 humain code le régulateur circadien Period 1 (Per1), un composant central de l’horloge moléculaire qui génère des rythmes proches de 24 heures via des boucles de rétroaction transcription–traduction. Per1 participe à la régulation circadienne de l’expression génique dans des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, le métabolisme et la signalisation endocrinienne, en interagissant avec la transcription induite par CLOCK/ARNTL et la répression médiée par CRY. Une expression ou une rythmicité altérée de PER1 a été associée à des troubles des rythmes circadiens et a été rapportée dans des études sur la biologie des tumeurs, des phénotypes liés à l’humeur et des dérégulations métaboliques, reflétant des effets étendus sur les mécanismes de synchronisation cellulaire. Parce que PER1 relie des signaux environnementaux à des programmes transcriptionnels en aval, il est fréquemment utilisé pour explorer les réseaux contrôlés par l’horloge et les phénotypes cellulaires dépendants de l’heure de la journée.

Per1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PER1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Per1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PER1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PER1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Per1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PER1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Per1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Per1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PER1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.