Plasmide Double Nickase (h) PEPT1: sc-401259-NIC

SLC15A1 code pour PEPT1, un transporteur d’oligopeptides couplé aux protons qui assure l’absorption de di- et tripeptides ainsi que de xénobiotiques de type peptidique à travers la membrane apicale des cellules épithéliales, en particulier dans l’intestin grêle. PEPT1 soutient l’absorption des nutriments et l’homéostasie cellulaire de l’azote en couplant le transport des substrats au gradient transmembranaire de H+, en s’intégrant aux voies d’utilisation des acides aminés et aux programmes métaboliques de l’épithélium. Son activité influence la physiologie de la barrière intestinale et la différenciation épithéliale, et une expression altérée de SLC15A1 a été rapportée dans des contextes inflammatoires et métaboliques affectant la gestion des nutriments régulée par ce transporteur. Comme PEPT1 transporte également des composés peptidomimétiques, SLC15A1 constitue un modèle pour étudier la régulation des transporteurs de la famille des solute carriers, la cinétique du transport membranaire et les réponses de l’épithélium au stress.

PEPT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC15A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC15A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC15A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC15A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.