Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pepsin C (h): sc-404137

Présentation

PGC code la pepsine C, une endopeptidase aspartique (gastricsine) sécrétée sous forme de zymogène et activée en conditions acides afin de participer à la protéolyse gastrique. Dans l’estomac, la pepsine C contribue à la digestion des protéines dans la lumière gastrique et au traitement des peptides, en opérant au sein de réseaux de protéases dépendants de l’acidité qui complètent l’activité de la pepsine A. Des modifications de l’expression de PGC et des profils de sécrétion de la pepsine C ont été utilisées comme indicateurs de changements de la différenciation de la muqueuse gastrique et de l’homéostasie épithéliale. La dysrégulation des programmes de protéases gastriques est fréquemment étudiée dans le contexte du remodelage inflammatoire et de la transformation néoplasique du tractus gastro-intestinal supérieur, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles cellulaires gastriques et des systèmes dérivés de tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pepsin C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PGC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PGC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PGC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pepsin C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PGC pour l'étude de la signalisation de Pepsin C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PGC essentiels à la fonction de Pepsin C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PGC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pepsin C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pepsin C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PGC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pepsin C plasmide HDR (h) et le Pepsin C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PGC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PGC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.