Pepsin A4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418415

Panoramica

PGA4 codifica la pepsina A4, un’endopeptidasi aspartica prodotta come zimogeno secreto nella mucosa gastrica e attivata in condizioni acide per scindere proteine alimentari ed endogene. In quanto membro della famiglia delle pepsine, la pepsina A4 contribuisce alla proteostasi gastrointestinale, influenzando la generazione di peptidi, la digestione delle proteine nel lume e, a valle, la disponibilità di antigeni e nutrienti. La sua attività è integrata con la biologia dell’acidità gastrica e con i processi della barriera mucosale; un’espressione alterata o uno squilibrio tra proteasi vengono spesso valutati negli studi sul rimodellamento dell’epitelio gastrico e sulle patologie associate all’infiammazione. PGA4 è quindi rilevante per analizzare le vie dipendenti dalle proteasi nello stomaco e per ricerche orientate a biomarcatori in contesti di malattia gastrica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pepsin A4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PGA4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PGA4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PGA4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pepsin A4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PGA4 per lo studio della segnalazione di Pepsin A4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PGA4 critici per la funzione di Pepsin A4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PGA4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PGA4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pepsin A4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pepsin A4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PGA4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PGA4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.