PEPCK-M/PCK2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400725-NIC

Das humane PCK2 kodiert die mitochondriale Isoform der Phosphoenolpyruvat-Carboxykinase (PEPCK-M), ein zentrales gluconeogenes und anaplerotisches Enzym, das Oxalacetat zu Phosphoenolpyruvat umsetzt und damit Intermediäre des Citratzyklus mit zytosolischen biosynthetischen Stoffwechselwegen verbindet. Durch die Modulation des Kohlenstoffflusses zwischen mitochondrialen und zytosolischen Kompartimenten beeinflusst PCK2 den Glukose- und Lipidstoffwechsel, das Redoxgleichgewicht sowie die Nutzung von Aminosäuren unter Nährstoffstress. Die PCK2-Aktivität überschneidet sich mit Signal- und Stoffwechselwegen der metabolischen Anpassung, darunter Gluconeogenese, Kataplerose sowie Serin/Glycin- und Glyceroneogenese-Netzwerke. Eine dysregulierte PCK2-Expression oder -Funktion wurde mit veränderten metabolischen Zuständen in Verbindung gebracht, wie sie im Krebsstoffwechsel, bei Insulinresistenz und anderen Erkrankungen auftreten, die durch Störungen der mitochondrialen und der Glukose-Homöostase gekennzeichnet sind.

PEPCK-M/PCK2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PCK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PCK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PCK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PCK2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.