Plasmide CRISPR/Cas9 KO PELP1 (m): sc-429042

Présentation

PELP1 (protéine 1 riche en proline, acide glutamique et leucine), codée par le gène murin *Pelp1*, est un corégulateur multifonctionnel des récepteurs nucléaires et une protéine d’échafaudage associée à la chromatine, qui intègre la signalisation des hormones stéroïdiennes aux mécanismes de contrôle transcriptionnel et épigénétique. Elle coordonne les interactions entre la signalisation du récepteur des œstrogènes et les complexes de remodelage de la chromatine, influençant la transcription dépendante de l’ARN polymérase II, les modifications des histones et la progression du cycle cellulaire. PELP1 interagit également avec des voies de kinases et les réponses aux dommages de l’ADN, reliant les signaux des facteurs de croissance aux programmes d’expression génique et au maintien du génome. Une activité et une localisation dérégulées de PELP1 ont été associées à une prolifération aberrante, à une signalisation endocrine altérée et à des réseaux transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie hormono‑dépendante et des voies associées aux tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PELP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pelp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pelp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pelp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PELP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pelp1 pour l'étude de la signalisation de PELP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pelp1 essentiels à la fonction de PELP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pelp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PELP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PELP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pelp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PELP1 plasmide HDR (m) et le PELP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pelp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pelp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.