Plasmide Double Nickase (h) PELO: sc-405192-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PELO correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PELO Double Nickase (h) et le plasmide PELO Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PELO. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PELO Antibody (F-4): sc-393418
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PELO | sc-405192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PELO | sc-405192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PELO (pelota homolog) code un facteur conservé de sauvetage des ribosomes, qui reconnaît les ribosomes bloqués en cours de traduction et favorise la résolution des ARNm aberrants, contribuant ainsi à l’homéostasie globale de la traduction et à la surveillance des ARNm. PELO agit avec HBS1L dans les voies de dégradation « no-go » et de contrôle qualité des ribosomes, en facilitant la dissociation des complexes 80S bloqués et le recyclage des sous-unités ribosomiques. Par son rôle dans la protéostasie et l’adaptation au stress, une activité altérée de PELO peut influencer le contrôle du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et la sensibilité aux stress protéotoxique et génotoxique. La dérégulation des réseaux de contrôle qualité de la traduction impliquant PELO a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des états cellulaires liés au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du métabolisme de l’ARN et de la fidélité de la synthèse protéique.
PELO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PELO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PELO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PELO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PELO.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.