Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pellino 2: sc-402305-ACT

Le gène humain PELI2 code Pellino 2, une ligase E3 de l’ubiquitine qui contribue à coupler la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) aux réponses inflammatoires et antivirales en aval. Pellino 2 participe à la régulation, dépendante de l’ubiquitine, de complexes d’adaptateurs et de kinases au sein des voies des récepteurs Toll-like et du récepteur de l’interleukine‑1, modulant l’activation des voies NF‑κB et MAPK et influençant la production de cytokines. En modulant le renouvellement des protéines et l’amplitude du signal, PELI2 contribue à l’homéostasie de l’immunité innée et aux réponses cellulaires au stress pertinentes pour la dérégulation de la signalisation inflammatoire. Une régulation altérée de l’ubiquitination et des voies d’immunité innée impliquant Pellino 2 a été étudiée dans le contexte de mécanismes de maladies à médiation immunitaire et des interactions hôte–pathogène.

Pellino 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PELI2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pellino 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PELI2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PELI2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pellino 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PELI2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pellino 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pellino 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PELI2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.