Plasmide CRISPR d'Activation (m) Peg10: sc-431278-ACT

La protéine Peg10 de souris (paternally expressed gene 10) est issue de la domestication d’un rétrotransposon et présente des caractéristiques de type Gag et Pol ; elle favorise la survie cellulaire, la prolifération et une différenciation spécifique de lignée. Peg10 est régulé par l’empreinte génomique et contribue à des programmes de développement, notamment la croissance placentaire et embryonnaire, via un contrôle transcriptionnel et post-transcriptionnel de l’expression génique. Au niveau cellulaire, Peg10 a été associé à des voies impliquées dans la résistance à l’apoptose et la protéostasie, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans le contexte de la transformation oncogénique, du remodelage tissulaire et de signalisations de croissance aberrantes. Ces propriétés font de Peg10 une cible pertinente pour l’étude des réseaux de gènes soumis à empreinte, de la biologie du développement et des altérations pathologiques des circuits de régulation de l’expression génique.

Peg10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Peg10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Peg10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Peg10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Peg10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Peg10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Peg10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Peg10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Peg10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Peg10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.