PECI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406564

Übersicht

ECI2 kodiert die peroxisomale D3,D2-Enoyl-CoA-Isomerase (PECI), ein Hilfsenzym, das für die peroxisomale β-Oxidation ungesättigter Fettsäureacyl-CoAs erforderlich ist. PECI katalysiert Isomerisierungsschritte, die eine fortgesetzte Kettenverkürzung sowie die Koordination mit nachgeschalteten Dehydrierungs- und Thiolyse-Reaktionen ermöglichen und damit den Lipidabbau und die zelluläre Energiehomöostase unterstützen. Über seine Funktion im peroxisomenabhängigen Fettsäurestoffwechsel trägt ECI2 zur Regulation der Lipidsignalgebung, des Redoxgleichgewichts und der metabolischen Anpassung unter Nährstoffstress bei. Eine Fehlregulation der peroxisomalen β-Oxidation und der Verarbeitung ungesättigter Fettsäuren ist relevant für Mechanismen metabolischer Erkrankungen, Lipidspeicher-Phänotypen sowie für umfassendere metabolische Umprogrammierungen, wie sie in der Krebs- und Neurodegenerationsforschung beobachtet werden.

Das PECI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ECI2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ECI2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ECI2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PECI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ECI2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PECI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ECI2-Exone abzielen, die für die PECI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ECI2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PECI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PECI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ECI2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PECI HDR-Plasmid (h) und PECI HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ECI2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ECI2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.