Plasmide CRISPR d'Activation (h) PEBP2β: sc-401983-ACT

CBFB code la sous-unité bêta du core-binding factor (PEBP2β), un partenaire ne se liant pas à l’ADN qui forme un hétérodimère avec les facteurs de transcription de la famille RUNX afin d’accroître la liaison à l’ADN et de stabiliser les complexes transcriptionnels. Cet axe RUNX/CBFβ régule des programmes d’expression génique spécifiques de lignée, essentiels à l’hématopoïèse, à la différenciation immunitaire, à l’ostéogenèse et au contrôle du cycle cellulaire. La transcription dépendante de CBFB influence des voies qui gouvernent le développement myéloïde et lymphoïde, les sorties de signalisation des cytokines, ainsi que la maturation des lignées squelettiques et stromales. La dérégulation de CBFB, notamment via des réarrangements chromosomiques et des interactions RUNX altérées, est impliquée dans la biologie des hémopathies malignes et dans des phénotypes du développement, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

PEBP2β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CBFB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PEBP2β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CBFB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CBFB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PEBP2β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CBFB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PEBP2β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PEBP2β dans les cellules tumorales présentant une expression de CBFB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.