Plasmide Double Nickase (h) PEA3: sc-401704-NIC

ETV4 code le facteur de transcription de la famille ETS PEA3, un régulateur se liant à l’ADN qui intègre des signaux dépendants de la voie MAPK/ERK afin de contrôler des programmes géniques impliqués dans la prolifération et la différenciation cellulaires, la transition épithélio-mésenchymateuse et la migration. PEA3 module la transcription en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et coopère avec AP-1 et d’autres cofacteurs pour réguler des cibles liées au remodelage de la matrice extracellulaire et à des phénotypes associés à l’invasion. Une expression ou une activité dérégulée d’ETV4 est fréquemment associée à des états de signalisation oncogénique et à des comportements métastatiques altérés dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude du contrôle transcriptionnel de la progression tumorale. De plus, ETV4 participe à des programmes de développement et de spécification de lignée, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques des transitions d’état cellulaire.

PEA3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETV4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETV4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETV4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETV4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.