Plásmido Doble Nickase (h) PDZ-RhoGEF: sc-403444-NIC

ARHGEF11 codifica PDZ-RhoGEF, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina específico de RhoA que conecta la señalización de GPCR acoplados a Gα12/13 activados con la activación de la GTPasa Rho y la contractilidad actomiosínica posterior. Mediante la regulación del remodelado del citoesqueleto, la formación de fibras de estrés, la dinámica de las adhesiones focales y la polaridad celular, PDZ-RhoGEF influye en procesos como la migración, la adhesión y la función de barrera epitelial. El andamiaje mediado por el dominio PDZ y la interconexión de vías de señalización integran entradas procedentes de la señalización de receptores y de complejos de unión para modular la salida de la vía Rho/ROCK. La desregulación de la señalización de RhoA y las alteraciones de la red asociada a ARHGEF11 se han implicado en fenotipos patológicos de motilidad e invasión celular y en cambios más amplios de señalización relevantes para la enfermedad en contextos de cáncer e inflamación.

PDZ-RhoGEF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARHGEF11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARHGEF11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARHGEF11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARHGEF11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.