PDP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406956

Übersicht

Die Pyruvatdehydrogenase-Phosphatase, katalytische Untereinheit 2 (PDP2), ist ein mitochondriales Enzym, das den Pyruvatdehydrogenase-Komplex dephosphoryliert und aktiviert. Dadurch fördert es die Umwandlung von Pyruvat zu Acetyl‑CoA und koordiniert den Eintritt glykolytischer Kohlenstoffatome in den Citratzyklus (TCA-Zyklus). Durch die Feinabstimmung der PDH-Aktivität trägt PDP2 zur metabolischen Flexibilität, zum Redoxgleichgewicht und zur zellulären Energiehomöostase bei und verknüpft so die Nährstoffverfügbarkeit mit dem oxidativen Stoffwechsel. Eine veränderte Regulation der PDH–PDP-Achse wird mit der metabolischen Umprogrammierung in Erkrankungen in Verbindung gebracht, die die mitochondriale Funktion betreffen, sowie in Situationen mit abnormer Glukose- und Lipidverwertung, was PDP2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der mitochondrialen Bioenergetik macht. PDP2 bietet außerdem einen Ansatzpunkt, um Signaleingänge zu untersuchen, die den Phosphorylierungszustand von PDH und nachgeschaltete Acetyl‑CoA-abhängige Prozesse modulieren.

Das PDP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PDP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PDP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDP2-Exone abzielen, die für die PDP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PDP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PDP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PDP2 HDR-Plasmid (h) und PDP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.