Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDLIM5 (h): sc-405340

Présentation

PDLIM5 code une protéine échafaudage à domaines PDZ-LIM qui se localise dans des structures riches en actine et relie l’architecture du cytosquelette à des complexes de signalisation au niveau des adhérences focales et le long des fibres de stress. Grâce à ses interactions avec des kinases et des partenaires associés à l’actine, PDLIM5 contribue à la mécanotransduction, à l’adhésion et à la migration cellulaires, ainsi qu’à l’organisation d’éléments contractiles qui influencent la morphologie cellulaire et la transmission des forces. Dans les tissus excitables, PDLIM5 a été associé à la régulation de la signalisation du cytosquelette dans les neurones et le cœur, ainsi qu’au remodelage synaptique ou contractile. Une expression altérée de PDLIM5 ou des variations génétiques ont été rapportées dans des études portant sur des phénotypes neuropsychiatriques et des pathologies cardiaques, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude, dans des modèles liés aux maladies, de réseaux de signalisation couplés au cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDLIM5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDLIM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDLIM5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDLIM5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDLIM5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDLIM5 pour l'étude de la signalisation de PDLIM5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDLIM5 essentiels à la fonction de PDLIM5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDLIM5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDLIM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDLIM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDLIM5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDLIM5 plasmide HDR (h) et le PDLIM5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDLIM5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDLIM5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.