PDLIM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405340

Übersicht

PDLIM5 kodiert ein Scaffold-Protein mit PDZ- und LIM-Domäne, das an aktinreichen Strukturen lokalisiert und die Zytoskelettarchitektur mit Signalkomplexen an Fokalkontakten und entlang von Stressfasern verknüpft. Über Interaktionen mit Kinasen und aktinassoziierten Partnern trägt PDLIM5 zur Mechanotransduktion, zur Zelladhäsion und -migration sowie zur Organisation kontraktiler Elemente bei, die die Zellmorphologie und die Kraftübertragung beeinflussen. In erregbaren Geweben wird PDLIM5 mit der Regulation zytoskelettaler Signalwege in Neuronen und im Herzen sowie mit synaptischem bzw. kontraktilem Remodeling in Verbindung gebracht. Veränderte PDLIM5-Expression oder genetische Varianten wurden in Studien zu neuropsychiatrischen Phänotypen und kardialen Pathologien beschrieben, was seine Relevanz für die Untersuchung zytoskelettgekoppelter Signalnetzwerke in krankheitsrelevanten Modellen unterstreicht.

Das PDLIM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDLIM5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDLIM5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDLIM5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PDLIM5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDLIM5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PDLIM5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDLIM5-Exone abzielen, die für die PDLIM5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDLIM5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PDLIM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PDLIM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDLIM5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PDLIM5 HDR-Plasmid (h) und PDLIM5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDLIM5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDLIM5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.