Plasmide Double Nickase (h) PDK4: sc-401355-NIC

PDK4 code la pyruvate déshydrogénase kinase 4, une enzyme mitochondriale qui phosphoryle et inhibe le complexe pyruvate déshydrogénase, réduisant ainsi la conversion du pyruvate en acétyl‑CoA et réorientant le flux carboné de l’oxydation du glucose vers l’utilisation des acides gras. Son expression est régulée par l’état nutritionnel et les hormones, et elle intègre des signaux provenant de voies telles que la signalisation PPAR, le contrôle transcriptionnel médié par l’insuline/FOXO et la détection de l’état énergétique cellulaire, qui modulent le métabolisme mitochondrial. Une activité altérée de PDK4 est associée au remodelage métabolique et au changement de substrat mitochondrial observés notamment dans la résistance à l’insuline, l’obésité, le diabète de type 2 et le stress métabolique cardiaque. Comme PDK4 influence l’apport à la phosphorylation oxydative et la disponibilité en acétyl‑CoA, elle est fréquemment étudiée dans des modèles d’adaptation métabolique, de stress oxydant et de reprogrammation du métabolisme énergétique liée à l’inflammation.

PDK4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDK4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDK4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDK4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDK4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.