PDK4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401355-NIC

PDK4 kodiert die Pyruvatdehydrogenase‑Kinase 4, ein mitochondriales Enzym, das den Pyruvatdehydrogenase‑Komplex phosphoryliert und hemmt. Dadurch wird die Umwandlung von Pyruvat zu Acetyl‑CoA verringert und der Kohlenstofffluss von der Glukoseoxidation hin zur Nutzung von Fettsäuren verschoben. Die Expression von PDK4 wird durch den Nährstoffstatus und Hormone reguliert und integriert Signale aus Signalwegen wie der PPAR‑Signalgebung, der insulin-/FOXO‑vermittelten transkriptionellen Kontrolle sowie der zellulären Energiesensorik, die den mitochondrialen Stoffwechsel modulieren. Eine veränderte PDK4‑Aktivität ist mit metabolischem Remodeling und einem Wechsel der mitochondrialen Substratnutzung assoziiert, wie er u. a. bei Insulinresistenz, Adipositas, Typ‑2‑Diabetes und kardialem metabolischem Stress beobachtet wird. Da PDK4 den Input in die oxidative Phosphorylierung und die Verfügbarkeit von Acetyl‑CoA beeinflusst, wird es häufig in Modellen der metabolischen Anpassung, des oxidativen Stresses und der entzündungsgekoppelten Umprogrammierung des Energiestoffwechsels untersucht.

PDK4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDK4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDK4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDK4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDK4-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.