Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDGF Receptor beta/PDGFRB: sc-400187-ACT

PDGFRB code le récepteur bêta du facteur de croissance dérivé des plaquettes (platelet-derived growth factor receptor beta, PDGFRβ), une tyrosine kinase membranaire qui se lie à PDGF‑BB et à des ligands apparentés afin de réguler la prolifération, la survie et la migration des cellules mésenchymateuses. Après activation, PDGFRβ déclenche une autophosphorylation et propage la signalisation via les voies PI3K–AKT, RAS–MAPK, PLCγ–PKC et STAT, coordonnant le remodelage du cytosquelette et les interactions avec la matrice extracellulaire. Ce récepteur joue un rôle central dans le développement vasculaire et le recrutement des péricytes, contribuant à la stabilisation des vaisseaux et aux processus de réparation tissulaire. Une signalisation PDGFRB dérégulée ou des fusions aberrantes de PDGFRB sont impliquées dans des états fibroprolifératifs, l’angiogenèse pathologique et le dialogue tumeur–stroma, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de la biologie stromale.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDGFRB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDGFRB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDGFRB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDGF Receptor beta/PDGFRB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDGFRB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDGF Receptor beta/PDGFRB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDGF Receptor beta/PDGFRB dans les cellules tumorales présentant une expression de PDGFRB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.