Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-C (h): sc-401977

Présentation

PDGFC code le facteur de croissance dérivé des plaquettes C (PDGF‑C), un facteur de croissance sécrété activé par protéolyse, qui signale principalement via des complexes de récepteurs PDGF afin de réguler la prolifération et la migration des cellules mésenchymateuses, ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire. PDGF‑C contribue à la communication paracrine entre les compartiments stromal et épithélial et active des voies en aval telles que PI3K–AKT et MAPK/ERK, qui coordonnent le développement et la réparation des tissus. Une signalisation PDGF‑C dérégulée est associée à une angiogenèse aberrante, à un remodelage lié à la fibrose et aux interactions tumeur–stroma dans de multiples contextes pathologiques. Par conséquent, PDGFC est fréquemment étudié dans des modèles de biologie vasculaire, de réparation des plaies, de microenvironnements inflammatoires et de dialogues croisés de la signalisation oncogénique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDGFC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDGFC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDGFC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDGF-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDGFC pour l'étude de la signalisation de PDGF-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDGFC essentiels à la fonction de PDGF-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDGFC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDGF-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDGF-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDGFC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDGF-C plasmide HDR (h) et le PDGF-C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDGFC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDGFC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.