Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (r): sc-437277

Présentation

PDGF-B code la sous-unité B du facteur de croissance dérivé des plaquettes (platelet-derived growth factor), un facteur de croissance sécrété qui forme des homo- ou hétérodimères afin d’activer la signalisation via les récepteurs PDGFR ainsi que les voies en aval PI3K–AKT et RAS–MAPK. Dans les cellules de rat, PDGF-B régule la prolifération et la migration des cellules mésenchymateuses, le recrutement des péricytes et la maturation vasculaire, en influençant le remodelage de la matrice extracellulaire et l’homéostasie tissulaire. La signalisation induite par PDGF-B intervient dans la réparation des plaies et les réponses fibroprolifératives, et sa dérégulation est associée à une angiogenèse pathologique et à une activation stromale aberrante, pertinentes pour la biologie cardiovasculaire et rénale. Comme PDGF-B module la communication paracrine entre les compartiments endothélial, mural et stromal, il est largement étudié dans des modèles de remodelage associé à l’inflammation et de dynamique du microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDGF-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de PDGF-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de PDGF-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDGF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le PDGF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDGF-B plasmide HDR (r) et le PDGF-B (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.