Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (h): sc-400586

Présentation

PDGFB code la sous-unité B du platelet-derived growth factor (PDGF-B), un mitogène sécrété qui forme des dimères PDGF actifs et transmet principalement ses signaux via des récepteurs PDGF à activité tyrosine kinase afin de réguler le recrutement des péricytes, la maturation vasculaire et la prolifération des cellules mésenchymateuses. La signalisation induite par PDGF-B mobilise les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, modulant le remodelage du cytosquelette, la chimiotaxie et le dépôt de matrice extracellulaire dans les compartiments stromal et vasculaire. Une expression dérégulée de PDGFB ou une activation de l’axe PDGF est impliquée dans l’angiogenèse pathologique, le remodelage fibrotique et des circuits de croissance autocrines ou paracrines dépendants du PDGF observés dans divers microenvironnements tumoraux. Ainsi, PDGFB est largement étudié dans la communication endothélium–péricytes, la biologie de la réparation tissulaire et les réseaux de signalisation stromale pertinents pour le remodelage des tissus et la biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDGFB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDGFB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDGFB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDGF-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDGFB pour l'étude de la signalisation de PDGF-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDGFB essentiels à la fonction de PDGF-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDGFB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDGF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDGF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDGFB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDGF-B plasmide HDR (h) et le PDGF-B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDGFB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDGFB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.