Plásmido CRISPR de Activación (h) PDE7B: sc-411961-ACT

El gen humano **PDE7B** codifica la fosfodiesterasa 7B, una fosfodiesterasa específica de **AMPc** que hidroliza el AMP cíclico a **5′-AMP** y, de este modo, determina la amplitud y la duración de la señalización intracelular mediada por AMPc. Al controlar vías dependientes de AMPc, como la transcripción mediada por **PKA/CREB** y la modulación downstream de programas de señalización inmunitaria y neuronal, **PDE7B** contribuye a la regulación de la activación, la diferenciación y la supervivencia celulares. La expresión y la actividad de **PDE7B** se han vinculado a redes de señalización inflamatoria y a procesos relevantes en neurobiología, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la compartimentalización del AMPc y la integración de señales. Se ha descrito desregulación de la señalización asociada a **PDE7B** en contextos relacionados con disfunción inmunitaria y fenotipos del SNC, lo que respalda su investigación como modulador de vías en modelos de enfermedad.

PDE7B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDE7B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PDE7B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDE7B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDE7B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PDE7B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDE7B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PDE7B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PDE7B en células tumorales con expresión de PDE7B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.