Particules Lentivirales d'Activation (m) PDE4B: sc-422161-LAC

Le gène murin Pde4b code la phosphodiestérase spécifique de l’AMPc PDE4B, un régulateur clé de la signalisation intracellulaire par seconds messagers, qui met fin aux réponses à l’AMPc en hydrolysant l’AMPc en 5′-AMP. En modulant la transcription dépendante de l’axe AMPc/PKA/CREB et la rétroaction sur la signalisation MAPK, PDE4B influence l’intégration des signaux induits par les récepteurs et les seuils d’activation cellulaire. L’activité de PDE4B contribue à la modulation des réseaux de signalisation inflammatoire, notamment des voies en aval de la stimulation par des cytokines et des récepteurs de type Toll, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la fonction des cellules immunitaires. Une expression ou une signalisation de PDE4B dérégulée a été associée à des phénotypes inflammatoires et à des processus neuro-immuns, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des études de voies impliquées dans des maladies.

Les particules d'activation lentivirales PDE4B (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pde4b dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PDE4B (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pde4b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PDE4B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pde4b ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.