Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDE3B (h): sc-401773

Présentation

PDE3B code la phosphodiestérase 3B, une hydrolase cAMP/cGMP à double spécificité qui façonne des microdomaines de nucléotides cycliques et contrôle la signalisation dépendante de la PKA et de la PKG. Dans les adipocytes et les hépatocytes, PDE3B intègre les signaux de l’insuline et des catécholamines pour réguler la lipolyse, les programmes gluconéogéniques et le stockage énergétique via des voies incluant PI3K–AKT et des réseaux de phosphorylation en aval. Dans les cellules β pancréatiques, PDE3B module le couplage stimulus-sécrétion en ajustant la dynamique de l’AMPc, ce qui influence l’exocytose des granules d’insuline. Une activité de PDE3B dérégulée a été associée à des phénotypes métaboliques impliquant la sensibilité à l’insuline, la signalisation liée à l’obésité et l’homéostasie lipidique, ce qui étaye son intérêt pour des études mécanistiques en biologie endocrinienne et cardiométabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDE3B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDE3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDE3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDE3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDE3B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDE3B pour l'étude de la signalisation de PDE3B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDE3B essentiels à la fonction de PDE3B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDE3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDE3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDE3B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDE3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDE3B plasmide HDR (h) et le PDE3B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDE3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDE3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.