Plasmide Double Nickase (h) PDE3A: sc-402183-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PDE3A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PDE3A Double Nickase (h) et le plasmide PDE3A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PDE3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PDE3A Antibody (2D7): sc-293446
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PDE3A | sc-402183-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PDE3A | sc-402183-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La phosphodiestérase 3A (PDE3A) est une phosphodiestérase des nucléotides cycliques à double spécificité qui hydrolyse l’AMPc et le GMPc, modulant ainsi la dynamique des seconds messagers en aval des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) et de la signalisation par l’oxyde nitrique. En contrôlant le renouvellement des nucléotides cycliques, PDE3A influence des processus régulés par la PKA/PKG, notamment l’activité des canaux ioniques, la fonction plaquettaire et la contractilité du muscle lisse vasculaire, ainsi qu’une intégration plus large des signaux entre les voies AMPc et GMPc. Des altérations de l’activité de PDE3A ont été associées à des phénotypes cardiovasculaires et hématologiques dérégulés, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation dépendants des nucléotides cycliques dans les cellules humaines.
PDE3A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDE3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDE3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDE3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDE3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.