Plasmide CRISPR d'Activation (h) PDE2A: sc-401957-ACT

Le gène humain **PDE2A** code la phosphodiestérase 2A, une phosphodiestérase des nucléotides cycliques à double spécificité de substrat qui hydrolyse l’AMPc et le GMPc et couple les signaux oxyde nitrique–GMPc aux voies dépendantes de l’AMPc. En façonnant les gradients de nucléotides cycliques, PDE2A module la signalisation PKA/PKG, l’homéostasie du calcium et des programmes transcriptionnels en aval qui influencent l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique, ainsi que les réponses vasculaires et cardiaques. L’activité de PDE2A est impliquée dans la régulation des réponses mitochondriales et du stress inflammatoire via l’axe AMPc/CREB et des nœuds de signalisation apparentés. Une dérégulation du renouvellement des nucléotides cycliques impliquant PDE2A a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodégénératifs ainsi qu’à des dysfonctionnements cardiométaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les voies de signalisation dans des modèles liés aux maladies.

PDE2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDE2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDE2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDE2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDE2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDE2A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDE2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDE2A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDE2A dans les cellules tumorales présentant une expression de PDE2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.