PDE2A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401957-ACT

O gene humano **PDE2A** codifica a fosfodiesterase 2A, uma fosfodiesterase de nucleotídeos cíclicos de duplo substrato que hidrolisa **cAMP** e **cGMP** e acopla sinais de **óxido nítrico–cGMP** a vias dependentes de **cAMP**. Ao moldar gradientes de nucleotídeos cíclicos, a PDE2A modula a sinalização de **PKA/PKG**, o manejo de cálcio e programas transcricionais a jusante que influenciam a excitabilidade neuronal e a plasticidade sináptica, bem como respostas vasculares e cardíacas. A atividade da PDE2A está implicada na regulação de respostas de estresse mitocondrial e inflamatório por meio de **cAMP/CREB** e nós de sinalização relacionados. A desregulação do turnover de nucleotídeos cíclicos envolvendo a PDE2A tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos e a disfunção cardiometabólica, apoiando seu uso como alvo para dissecar vias em modelos relevantes para doenças.

PDE2A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDE2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDE2A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDE2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDE2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDE2A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDE2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDE2A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDE2A em células tumorais com expressão de PDE2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.