Plasmide CRISPR d'Activation (m) PDCD1LG2/PD-L2: sc-425483-ACT

Pdcd1lg2 code PDCD1LG2/PD‑L2, un ligand de point de contrôle immunitaire exprimé sur les cellules présentatrices d’antigènes et inductible sur certains types de cellules stromales et associées aux tumeurs, qui se lie à PD‑1 sur les lymphocytes T activés. La signalisation PD‑L2–PD‑1 atténue l’activation induite par le TCR, la production de cytokines et la prolifération via le recrutement de phosphatases inhibitrices et l’atténuation en aval des voies PI3K–AKT et MAPK, modulant la tolérance périphérique et les seuils d’inflammation. Dans des modèles murins, la régulation de Pdcd1lg2 contribue au contrôle de l’épuisement des lymphocytes T, de la polarisation Th1/Th2 et du privilège immunitaire local au sein des tissus. Une expression dérégulée de PD‑L2 est étudiée dans des contextes incluant l’infection chronique, l’auto-immunité, l’immunobiologie de la transplantation et l’échappement immunitaire dans le microenvironnement tumoral, en tant que biomarqueur mécanistique de l’immunosuppression.

PDCD1LG2/PD-L2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pdcd1lg2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PDCD1LG2/PD-L2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pdcd1lg2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pdcd1lg2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PDCD1LG2/PD-L2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pdcd1lg2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PDCD1LG2/PD-L2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PDCD1LG2/PD-L2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pdcd1lg2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.