Plasmide CRISPR d'Activation (m) Pdcd-4: sc-422152-ACT

La Pdcd4 murine (programmed cell death 4) code Pdcd-4, une protéine de liaison à l’ARN associée à l’activité de suppresseur de tumeur, qui réprime la traduction dépendante de la coiffe en inhibant l’activité hélicase d’eIF4A et en modulant la transcription dépendante d’AP-1. Pdcd-4 intègre des signaux issus des voies des facteurs de croissance et de l’inflammation, et son expression est fréquemment diminuée par des voies oncogéniques telles que PI3K/AKT/mTOR ainsi que par un contrôle post-transcriptionnel médié par des microARN, influençant la prolifération, l’apoptose et la différenciation cellulaire. Par ces mécanismes, Pdcd-4 est souvent étudiée dans des contextes de transformation, de phénotypes liés aux métastases et de réponses au stress, ainsi qu’en immunologie et en biologie de l’inflammation, où le contrôle translationnel façonne les programmes de cytokines.

Pdcd-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pdcd4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pdcd-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pdcd4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pdcd4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pdcd-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pdcd4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pdcd-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pdcd-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pdcd4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.