Pdcd-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422150-NIC

A morte celular programada 1 (Pdcd1; PD-1, Pdcd-1) codifica um imunorreceptor inibitório expresso principalmente em células T ativadas, células B e subpopulações mieloides, que limita a ativação imunitária e promove a tolerância periférica. Após a ligação a PD-L1 (Cd274) ou PD-L2 (Pdcd1lg2), o PD-1 recruta fosfatases SHP para atenuar a sinalização proximal do TCR/CD28, reduzindo a atividade das vias PI3K–AKT e RAS–MAPK e limitando a produção de citocinas, a proliferação e a reprogramação metabólica. Este eixo de checkpoint é central para a exaustão das células T e para estados de diferenciação durante a exposição crónica a antigénios, além de moldar as respostas do centro germinativo e a desregulação imunitária associada à autoimunidade. Em modelos murinos, a função de Pdcd1 é amplamente estudada em imunologia tumoral, infeção crónica e mecanismos de doenças inflamatórias, nos quais alterações na sinalização de PD-1 afetam a homeostase imunitária.

Pdcd-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Pdcd1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Pdcd1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Pdcd1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Pdcd1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.