Plasmide Double Nickase (m) Pdcd-1: sc-422150-NIC

La mort cellulaire programmée 1 (Pdcd1 ; PD-1, Pdcd-1) code un immunorécepteur inhibiteur exprimé principalement à la surface des lymphocytes T activés, des lymphocytes B et de certains sous-types myéloïdes, qui freine l’activation immunitaire et favorise la tolérance périphérique. Lorsqu’il est engagé par PD-L1 (Cd274) ou PD-L2 (Pdcd1lg2), PD-1 recrute des phosphatases SHP afin d’atténuer la signalisation proximale TCR/CD28, ce qui réduit l’activité des voies PI3K–AKT et RAS–MAPK et limite la production de cytokines, la prolifération et la reprogrammation métabolique. Cet axe de point de contrôle est central dans l’épuisement des lymphocytes T et dans les états de différenciation lors d’une exposition antigénique chronique, et il façonne les réponses des centres germinatifs ainsi que les dérégulations immunitaires associées à l’auto-immunité. Dans les modèles murins, la fonction de Pdcd1 est largement étudiée en immunologie des tumeurs, dans les infections chroniques et dans les mécanismes des maladies inflammatoires, où une signalisation PD-1 altérée affecte l’homéostasie immunitaire.

Pdcd-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pdcd1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pdcd1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pdcd1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pdcd1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.