Plasmide Double Nickase (h) Pdcd-1: sc-403008-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Pdcd-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pdcd-1 Double Nickase (h) et le plasmide Pdcd-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PDCD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Pdcd-1 | sc-403008-NIC | 20 µg | $410.00 |
PDCD1 code Pdcd-1 (PD-1), un récepteur inhibiteur de point de contrôle immunitaire exprimé principalement à la surface des lymphocytes T activés, des lymphocytes B et de certains sous-types myéloïdes, qui atténue la signalisation des récepteurs de l’antigène afin de maintenir la tolérance périphérique. Lors de sa liaison à PD-L1 ou PD-L2, Pdcd-1 recrute des phosphatases telles que SHP2 pour déphosphoryler des nœuds de signalisation proximaux, inhibant les voies PI3K–AKT et RAS–MAPK et réduisant la production de cytokines, la prolifération et l’activité cytotoxique. La régulation de PDCD1 influence les programmes d’épuisement des lymphocytes T lors d’une exposition antigénique chronique et façonne le microenvironnement tumoral en modulant la fonction effectrice et la surveillance immunitaire. Une signalisation Pdcd-1 dérégulée est impliquée dans l’échappement immunitaire des cancers, les infections virales persistantes et des phénotypes auto-immuns associés à une altération des points de contrôle de la tolérance.
Pdcd-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDCD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDCD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDCD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDCD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.