Pdcd-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422150-ACT

A proteína 1 de morte celular programada (Pdcd1; PD-1) é um receptor inibitório expresso predominantemente em células T ativadas, células B e populações mieloides, onde restringe a sinalização do receptor de antígeno e limita a diferenciação efetora. A ligação de PD-1 inicia a sinalização do motivo de comutação baseado em tirosina de receptores imunológicos (ITSM), que recruta fosfatases como a SHP2, atenuando vias proximais do TCR/CD28, incluindo PI3K–AKT e RAS–MAPK, para modular a produção de citocinas, a proliferação e a aptidão metabólica. Pdcd1 é um regulador-chave da tolerância periférica e da homeostase imunológica, e sua expressão sustentada está associada a programas de exaustão de células T durante inflamação crônica e exposição persistente a antígenos. Em modelos murinos, a dinâmica de expressão de Pdcd1 é amplamente utilizada para estudar a regulação imunológica em contextos como infecção, autoimunidade e imunologia de tumores.

Pdcd-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pdcd1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pdcd-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pdcd1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pdcd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pdcd-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pdcd1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pdcd-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pdcd-1 em células tumorais com expressão de Pdcd1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.