Plasmide CRISPR d'Activation (h) PCM1: sc-401360-ACT

Le gène humain **PCM1** code la protéine *pericentriolar material 1*, une protéine d’échafaudage associée au centrosome et aux satellites centriolaires, qui organise la matrice péricentriolaire et contribue à l’intégrité du centrosome. PCM1 aide à recruter et à ancrer des composants centrosomaux tels que les facteurs du complexe en anneau de la γ-tubuline et des protéines des satellites, reliant la nucléation des microtubules, la maturation du centrosome et la progression du cycle cellulaire. Par ces fonctions, elle influence la ciliogenèse et l’organisation du cytosquelette, des processus essentiels à la fidélité de la mitose et au trafic intracellulaire. Une dérégulation de PCM1 ainsi que des réarrangements impliquant PCM1 ont été rapportés dans des contextes cancéreux et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la stabilité du génome associée au centrosome et des phénotypes de signalisation.

PCM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PCM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PCM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PCM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PCM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.