Plasmide Double Nickase (h) PCIF1: sc-407384-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PCIF1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PCIF1 Double Nickase (h) et le plasmide PCIF1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PCIF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PCIF1 Antibody (A-9): sc-374406
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PCIF1 | sc-407384-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PCIF1 | sc-407384-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCIF1 (phosphorylated CTD interacting factor 1) est une méthyltransférase associée à la coiffe des ARNm qui catalyse la N6‑méthylation de la 2′‑O‑méthyladénosine au niveau du premier nucléotide transcrit (m6Am), adjacent à la coiffe m7G, contribuant ainsi à façonner le paysage des modifications de l’ARN à proximité de la coiffe. Par cette activité, PCIF1 influence la stabilité des ARNm, l’efficacité de traduction et des programmes d’expression génique spécifiques des transcrits, en interaction avec la maturation de l’ARN et la régulation épitranscriptomique. La m6Am dépendante de PCIF1 a été associée à la modulation des réponses cellulaires au stress ainsi qu’aux voies de signalisation du développement et de la prolifération via un contrôle post‑transcriptionnel. La dérégulation de la méthylation proximale de la coiffe et de l’expression de PCIF1 a été étudiée dans des contextes incluant la biologie tumorale et l’expression de gènes liés à l’immunité, soulignant sa pertinence pour des études mécanistiques des phénotypes induits par les modifications de l’ARN.
PCIF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PCIF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PCIF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PCIF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PCIF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.