PCIF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407384-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PCIF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PCIF1 Double Nickase Plasmid (h) e il PCIF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PCIF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PCIF1 Antibody (A-9): sc-374406
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PCIF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407384-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCIF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407384-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCIF1 (phosphorylated CTD interacting factor 1) è una metiltransferasi associata al cappuccio dell’mRNA che catalizza la N6-metilazione della 2′-O-metiladenosina al primo nucleotide trascritto (m6Am) adiacente al cap m7G, modellando il panorama delle modifiche dell’RNA in prossimità del cap. Attraverso questa attività, PCIF1 influenza la stabilità dell’mRNA, l’efficienza di traduzione e programmi di espressione genica specifici per trascritto che si intrecciano con il processamento dell’RNA e la regolazione epitranscrittomica. La m6Am dipendente da PCIF1 è stata collegata alla modulazione delle risposte cellulari allo stress e degli output di segnalazione nello sviluppo e nella proliferazione tramite controllo post-trascrizionale. La disregolazione della metilazione prossimale al cap e dell’espressione di PCIF1 è stata investigata in contesti che includono la biologia tumorale e l’espressione di geni legati all’immunità, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici di fenotipi guidati dalle modifiche dell’RNA.
PCIF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PCIF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PCIF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PCIF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PCIF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.