PCGF3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405260

Descripción general

PCGF3 (dedo anular del grupo Polycomb 3) es un componente central del complejo represor Polycomb 1 (PRC1) no canónico, y funciona como una ligasa de ubiquitina E3 en conjunto con RING1A/RING1B para catalizar la monoubiquitinación de la histona H2A (H2AK119ub). A través de esta actividad, PCGF3 contribuye a la represión transcripcional mediada por Polycomb, a la memoria epigenética y a la compactación de la cromatina, lo que ayuda a coordinar programas de expresión génica del desarrollo y decisiones de destino celular. Los complejos PRC1 que contienen PCGF3 se integran con redes más amplias de regulación de la cromatina, incluido el equilibrio Polycomb/Trithorax y el diálogo cruzado con la metilación de H3K27 dependiente de PRC2. La desregulación de la señalización de Polycomb y de la composición de subunidades de PRC1 se asocia con frecuencia a un silenciamiento génico aberrante y a la reprogramación transcripcional observados en el cáncer y otros trastornos de etiología epigenética, lo que impulsa estudios mecanísticos de la función de PCGF3 en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PCGF3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PCGF3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PCGF3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PCGF3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PCGF3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PCGF3 para la investigación de la señalización de PCGF3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PCGF3 críticos para la función de PCGF3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PCGF3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PCGF3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PCGF3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PCGF3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PCGF3 (h) y el plásmido HDR PCGF3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PCGF3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PCGF3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.