Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCDH17 (h): sc-405740

Présentation

PCDH17 (protocadhérine-17) est une molécule d’adhérence intercellulaire dépendante du calcium de la famille des protocadhérines, impliquée dans l’établissement et le maintien de l’architecture des tissus, en particulier dans le système nerveux. En médiant des interactions homophiles à la membrane plasmique, PCDH17 contribue à la croissance des neurites, à la connectivité synaptique et aux processus de tri cellulaire qui façonnent la formation des circuits. Les dynamiques d’adhérence associées à PCDH17 s’articulent avec le remodelage du cytosquelette et des voies de signalisation régulant la migration et la différenciation, notamment des processus liés aux GTPases de la famille Rho. Une expression dérégulée de PCDH17 ou son silençage épigénétique a été rapporté dans plusieurs contextes tumoraux et fait l’objet d’études pour ses rôles dans l’altération de l’adhérence, le comportement invasif et des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCDH17 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCDH17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCDH17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCDH17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCDH17.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCDH17 pour l'étude de la signalisation de PCDH17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCDH17 essentiels à la fonction de PCDH17
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCDH17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PCDH17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PCDH17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCDH17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PCDH17 plasmide HDR (h) et le PCDH17 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCDH17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCDH17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.