Plasmide Double Nickase (m) PB1: sc-426270-NIC

Le gène murin **Pbrm1** code PB1 (également appelé **PBRM1/BAF180**), une sous-unité emblématique du complexe de remodelage de la chromatine **SWI/SNF PBAF**, qui reconnaît les histones acétylées grâce à plusieurs bromodomaines et contribue au positionnement des nucléosomes pour réguler la transcription. PB1 influence la communication entre enhancers et promoteurs, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes de différenciation spécifiques de lignée, en coordonnant l’accessibilité de la chromatine avec la liaison des facteurs de transcription. La perte ou l’altération de **Pbrm1** perturbe le contrôle épigénétique des réseaux du cycle cellulaire et de la réponse au stress, et est fréquemment étudiée dans le cadre de la biologie des suppresseurs de tumeurs, de la stabilité du génome et de la signalisation inflammatoire. Dans les modèles murins, **Pbrm1** est largement utilisé pour analyser comment les remodelers de la chromatine façonnent les microenvironnements immunitaires, l’adaptation métabolique et les phénotypes du développement.

PB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pbrm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pbrm1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pbrm1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pbrm1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.