Plasmide CRISPR d'Activation (m) paxillin: sc-422546-ACT

Le gène murin **Pxn** code la paxilline, un adaptateur des adhésions focales qui coordonne la signalisation des intégrines avec le remodelage du cytosquelette d’actine afin de réguler l’adhérence cellulaire, l’étalement et la migration directionnelle. La paxilline sert de plateforme d’assemblage pour des kinases et des régulateurs de GTPases au niveau des sites d’adhésion, reliant les signaux issus de la matrice extracellulaire à des voies telles que FAK/Src, PI3K-AKT et la signalisation de la famille Rho, qui contrôlent les forces de traction et la mécanotransduction. Par l’intermédiaire de ces réseaux, la paxilline influence la prolifération, la survie et les dynamiques épithélio-mésenchymateuses, ce qui la rend pertinente pour l’étude des comportements cellulaires invasifs et du remodelage tissulaire. Une signalisation de la paxilline dérégulée et un renouvellement anormal des adhésions focales sont fréquemment étudiés dans des modèles de progression tumorale, de réparation des plaies et de microenvironnements inflammatoires.

paxillin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pxn sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

paxillin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pxn dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pxn, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de paxillin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pxn natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de paxillin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie paxillin dans les cellules tumorales présentant une expression de Pxn silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.